신뢰할 수 있는 흡수 결과 확인 방법
큐벳 기반 흡광도 측정은 측정에 사용되는 시스템만큼만 좋습니다. 다양한 주변 조건에 기인한 기준선 드리프트 및 기타 스펙트럼 변경 사항은 빈번한 배경 및 기준 측정을 통해 쉽게 해결됩니다. 쿠벳 대 쿠벳의 변동성은 일치하는 쿠벳을 사용하여 극복된다. 획득 파라미터들은 가능한 가장 높은 신호 대 잡음비를 제공하도록 설정된다.
그렇다면 표본을 꺼낼 때 기준선은 왜 0 이하로 떨어지는가? 왜 당신의 흡수도 값은 마이너스인가? 표준 곡선은 왜 그렇게 상관관계가 없는가? 답은 당신이 생각조차 하지 못하는 시스템의 한 구성 요소에 있다. 정확한 흡광도 데이터는 사용자가 반복적으로 큐벳을 제거하고 교체할 수 있도록 하는 잘 설계된 큐벳 홀더가 필요합니다(그림 1). 가장 비싸고 일치하는 석영 큐벳 세트조차도 큐벳이 지속적으로 큐벳 홀더에 배치되지 않으면 정확한 데이터를 제공하지 않습니다. 큐벳은 큐벳 홀더에 잘 들어맞아야하므로 스펙트럼 데이터의 변경 없이 제거하고 교체할 수 있습니다. 0 이하로 이동하는 기준선과 음의 흡광도 값은 문제의 즉각적인 경고 신호입니다. 이 문제들은 데이터를 문제라고 부르며 결과에 대한 자신감을 떨어뜨린다.이런 일이 일어날 때 수집한 데이터를 어떻게 믿을 수 있을까요?
그림 1. 모범 사례가 관찰되는 경우에도 이상적인 장비보다 적은 것이 실험 결과에 영향을 미칠 수 있습니다.SQUARE ONE 큐벳 홀더는 잘 맞지 않는 큐벳에서 비롯될 수 있는 것보다 흡광도 측정의 오류를 최소화한다.
스퀘어 원큐벳 홀더를 이용한 반복성
당신은 샘플을 만들고 실험을 설계하기 위해 열심히 노력했습니다. 일관되고 반복 가능한 측정 능력을 손상시키는 큐벳 홀더에 그 귀중한 시간과 노력을 낭비하지 마세요. 가장 정확하게 준비된 샘플의 결과조차도 측정에 사용된 시스템만큼 정확합니다. 큐벳 홀더가 당신의 일을 방해하게 하지 마세요. 스퀘어 원 큐벳 홀더를 사용하면 됩니다. 때로는 큐벳 홀더가 ‘느낌’을 제대로 느끼지 못합니다. 큐벳 홀더에 큐벳을 넣고, 당신의 큐벳이 얼마나 흔들릴지 질문해 본 적이 있나요? 큐벳이 안전하게 고정되지 않을 때 스펙트럼 데이터는 얼마나 반복될 수 있는가요?그림 2의 곡선처럼 표준 곡선이 부정확하게 보이는가요?
그림 2. 실제 농도와 흡광도 값 사이의 상관 관계가 낮은 표준 곡선의 예.단백질 농도, 샘플 준비의 오류 또는 큐벳 홀더의 큐벳 배치에서 반복성 부족으로 인한 흡광도의 차이는 있습니까?
Square 1로, 큐벳은 섬세한 큐벳 광학 표면을 손상시키지 않고 아늑하게 잡아준다. 큐벳 홀더에 큐벳을 삽입하면 사용자에게 큐벳이 안전하게 유지되는 촉각 피드백이 제공됩니다. SQUARE ONE은 석영(그림 3)과 플라스틱 일회용 큐벳(그림 4)으로 반복 가능한 데이터를 제공합니다. 이를 검증하기 위해 큐벳 홀더에서 큐벳을 10회 제거하고 교체하여 흡광도를 측정하였습니다.그림 3-4에서 보여 지듯이 석영 또는 덜 반복 가능한 일회용 큐벳을 사용하는지 여부에 관계없이 놀라운 합의로 결과 스펙트럼 오버레이가 수행됩니다.
그림 3. 희석된 녹색 식품 염료를 함유한 석영 큐벳(항목 CV-Q-10)을 제거하고 큐벳 홀더에서 10회 교체할 때 SQUARE ONE 스펙트럼 반복성.스펙트럼 오버레이는 스펙트럼 사이의 놀라운 일치로 거의 완벽하게 오버레이되며, 표준 편차가 0.0007 AU인 410 nm에서 평균 흡광도는 0.47 AU입니다.
그림 4. 약간 더 농축된 녹색 식품 염료를 함유한 일회용 큐벳이 제거되고 큐벳 홀더에서 10번 교체 될 때 1 스펙트럼 반복성이 좋습니다.일회용 큐벳(항목 CVD-UV-1S)을 사용하더라도 스펙트럼 오버레이는 410nm에서 평균 흡광도가 0.47 AU이며 표준 편차는 0.0008 AU에 불과하다.
스퀘어 원 큐벳 홀더에 대한 정보
SQUARE ONE 큐벳 홀더는 흡광도, 투과도 및 형광 측정을 수행하기 위해 1cm 길이의 큐벳을 안전하게 고정하도록 설계되었습니다. 각 홀더에는 광섬유 커플링을 가진 세 개의 시준 렌즈, 형광 측정의 민감도를 향상시키기 위한 통합 거울, 주변 조명을 차단하기 위한 완전히 통합된 커버, 12.5 및 25mm 직경 필터를 모두 수용하는 두 개의 필터 홀더가 포함됩니다.Ocean Optics 분광계 및 광원과 함께 사용할 때 SQUARE ONE은 이러한 광학 현상의 흡광도, 투과, 형광, 산란 또는 조합을 측정하는 데 이상적입니다.
추가 흡수율 측정 팁
스퀘어 원 큐벳 홀더를 포함한 최적화된 스펙트럼 장비를 사용하면 정확도를 더욱 향상시키기 위해 측정의 다른 측면으로 초점을 돌릴 수 있습니다.다음은 최고 품질의 흡광도 데이터에 대해 추천하는 몇 가지 모범 사례입니다.
- 흡수력은 큐벳에서 큐벳까지 다를 수 있다. 또한 큐벳이 모든 방향에서 동일한 경로 길이를 가지지 않으면 샘플 홀더의 큐벳 방향에 따라 달라집니다. 가장 정확한 방법은 항상 같은 큐벳을 사용한다.이것이 실현 가능하지 않다면, 큐벳 홀더에 놓일 때마다 같은 방향으로 큐벳을 향하도록 하십시오.
- 권장 시간(일부 경우에는 최대 30분) 동안 광원을 가열하십시오.광원 출력은 소스가 열 평형 상태에 있을 때까지 매우 약간 계속 변하여 측정에 영향을 미칩니다.
- 정확한 기준선을 다시 설정하기 위해 소프트웨어에서 자주 어두운 측정 및 참조 측정을 기록합니다.
- 광원을 끄거나 광섬유를 분리하여 어두운 측정을 하지 마십시오. 대신 광원의 원점 또는 큐벳 홀더의 필터 슬롯에서 광원을 차단합니다.사용된 물체가 빛의 100%를 차단할 수 있도록 하라.
- 기준 스펙트럼이 전체 카운트의 80%에서 90%로 피크가 되도록 분광계 통합 시간을 설정합니다.이것은 분광계의 전체 동적 범위를 이용하여 신호 대 잡음 성능을 개선한다.
- 신호 대 잡음을 개선하기 위해 스펙트럼 평균을 허용 가능한 만큼 높게 설정한다(S:N). S:N은 평균의 제곱근을 이용하여 개선된다.예를 들어, 평균을 9로 설정하면 S:N이 3배 향상됩니다.
- 박스카 값을 증가시키면 스펙트럼의 노이즈도 부드럽게 할 수 있다. 이것은 파장이 있는 이동 평균이므로, 박스카 값 2는 각 면의 추가 2픽셀(총 5개)을 평균화하고, 그 평균을 중앙픽셀에 할당한다. 박스카 값이 너무 높게 설정되면 스펙트럼 모양이 흐려지기 시작하므로 이 기능을 주의 깊게 사용합니다.해상도에 영향을 미치지 않고 데이터를 매끄럽게 하려면 상자 카 값을 분광계의 픽셀 해상도와 동일하게 설정하십시오.