미광은 주어진 분광계로 달성 할 수있는 최대 흡광도를 제한합니다. 표류 빛 한계에 도달하면, 더 농축 된 시료를 측정하기 위해 시료 희석 또는 더 작은 경로 길이가 필요합니다. 이 애플리케이션 노트에서는 최대 흡광도 수준에 미광의 영향을 보여주고 광원 선택을 최적화하여 미광을 최소화하고 측정 된 최대 흡광도를 증가시키는 방법을 설명합니다.
Introduction
주어진 분광계로 얻을 수있는 최대 흡광도는 부분적으로 미광에 의해 제한됩니다. 간단히 정의하면, 미광은 검출기에 도달하는 임의의 파장의 원하지 않는 빛이며 의도하지 않은 광원에서 검출기에 도달하는 빛을 포함합니다. 미광은 광학 구성 요소의 표면에서의 산란 또는 분광계의 다른 표면에서의 반사를 포함한 정상적인 광학적 동작에 의해 발생합니다. 검출기는 의도하지 않은 광원과 의도 된 광 경로에서 나오는 빛을 구별 할 수 없기 때문에 표 유광은 검출기의 동적 범위의 일부를 소비함으로써 얻을 수있는 최대 흡광도 수준을 제한합니다.
미광은 Beer-Lambert Law (흡광도와 농도의 관계)에서 명백한 편차로 나타납니다. 미광 성분이 총 투과광의 더 큰 부분이되기 때문에 분석 물 농도가 높을수록 효과가 더 분명합니다. 미광은 시료 농도가 높을수록 흡광도가 증가함에 따라 흡광도 대 농도 대 평탄화 또는 롤오프의 플롯에서 관찰됩니다. 이 응용 노트에서는 분광계로 얻을 수있는 최대 흡광도에 미광의 영향을 보여주고 광원을 최적화하여 미광을 최소화하고 측정 된 최대 흡광도를 증가시키는 방법을 설명합니다.
Experiment Details
다양한 농도의 Salmon DNA (Sigma D-1626)를 탈 이온수에서 제조 하였다. DNA 흡광도는 STS-UV 및 DH-2000-BAL 평형, 중수소 및 텅스텐 할로겐 광원의 중수소 램프가있는 1cm 경로 길이 큐벳에서 측정되었습니다. 측정은 중수소 및 텅스텐 할로겐 램프와 중수소 램프 만 사용하여 대역 외 광이 분광계로 얻은 최대 흡광도 수준에 미치는 영향을 보여주었습니다.
Results
흡광도 측정에 사용 된 광원의 영향은 동일한 분광계로 측정되었지만 다른 광원으로 측정 된 DNA 흡광도에 대한 그림에 나와 있습니다. 중수소와 텅스텐 할로겐 램프를 모두 사용하면 DNA가 흡수되는 영역 밖에서 가시 광선을 추가하기 때문에 벤치에서 전체 미광이 증가합니다. 결과적으로 동일한 STS-UV 및 DH-2000-BAL 광원으로 측정 한 DNA의 최대 흡광도는 ~ 1.7에 비해 ~ 2.1에 불과하며 중수소 램프 만 켜기 만하면됩니다. 미광은 선형성에 가장 큰 영향을 미칩니다. 듀얼 램프만 사용하는 경우 시스템의 선형 범위는 두 램프를 모두 사용하는 경우 1.2 AU에서 1.6 AU까지 떨어집니다. 최대 흡광도 및 흡광도 선형성 모두에 대한 극적인 영향에 의해 입증 된 바와 같이, 분석 대상 물질이 흡수되는 관심 영역 외부의 빛을 단순히 제거하면 희석 할 필요없이보다 농축 된 시료를 측정 할 수 있습니다. STS-UV의 경우, 측정을 위해 광원을 신중하게 선택하면 0.005 AU ~ 2.0 AU의 놀라운 다이나믹 레인지가 가능하며 선형 영역의 데이터는 UV 영역에서 약 1.6 AU까지 가능합니다.
Conclusions
미광은 항상 흡광도 측정에 사용되는 전체 시스템에 존재합니다. 그것은 매우 흡광도가 높은 샘플을 사용하여 시료 희석 또는 경로 길이 샘플링 셀을 필요로하는 최대 흡광도 측정을 제한합니다. 이 데이터에 의해 입증 된 것처럼, 미광을 감소시키는 한 가지 방법은 분광계에 들어오는 빛을 관리하는 것입니다. 관심 있는 파장 범위 밖의 빛을 사용하는 것을 피하기만 하면 분광계에서의 미광을 낮춤으로써 더 높은 최대 흡광도 측정을 위한 더 넓은 선형 측정 범위를 가능하게합니다. 미광의 일반적인 원인 중 많은 부분이 사용자의 제어 범위를 벗어나지만 광원 최적화는 흡광도 측정에 중요한 영향을 미치는 하나의 옵션입니다.