생물학적 분자는 농도 및 시료 순도에 대한 중요한 정보를 얻기 위해 자외선 흡광도를 사용하여 일상적으로 측정됩니다. 190 ~ 650 nm의 파장 범위와 약 1.5 nm의 광학 분해능을 갖춘 STS-UV 마이크로 분광계는 이러한 측정에 이상적입니다. STS-UV는 컴팩트하고 강력한 마이크로 분광계에 엄청난 성능을 제공하여 광범위한 샘플 농도에서 고품질 UV 흡광도 데이터를 제공합니다. 이 응용 노트에서 우리는 0.15 ~ 150 μg / mL 범위의 DNA 샘플의 흡광도 측정을 통해이 놀라운 성능을 입증합니다.
※ Introduction
DNA 측정은 일반적으로 매우 높거나 매우 낮은 농도로 용액에 부유 된 DNA로 농도 범위의 극단에있는 시료를 포함합니다. 희석은 농축 된 DNA 용액으로 할 수 있지만, 저농도 샘플은 더 많은 도전을 제시합니다. 조절 가능한 경로 길이 분광기 또는 소량 샘플러의 이점이 없으면, 넓은 범위의 농도를 측정 할 수 있도록 큐벳의 경로 길이 자체를 조정해야합니다. STS-UV의 높은 동적 범위와 신호 대 잡음비는 0.005에서 1.5 흡광도 (AU) 이상의 흡광도 수준을 수용 할 수 있도록 경로 길이를 변경할 필요없이 광범위한 농도에서 DNA 측정을 가능하게합니다.
※ Experiment Details
Salmon DNA (Sigma D-1626)의 다양한 농도가 탈 이온수에서 준비되었다. DNA 흡광도는 STS-UV 및 DH-2000-BAL 평형, 중수소 및 텅스텐 할로겐 광원의 중수소 램프가있는 1cm 경로 길이 큐벳에서 측정되었습니다. 측정은 중수소 및 텅스텐 할로겐 램프와 중금속 램프만으로 분광계로 달성 한 최대 흡광도 수준에 대한 대역 외 광의 영향을 보여주었습니다.
※ Results
낮은 농도의 DNA (0.15 ~ 2.5 μg / mL DNA)에 대해 STS-UV로 측정 한 260 nm (OD260)의 흡광도 및 흡광도를 그림 1과 2에 표시합니다.이 농도에서 반복 측정 한 결과, 0.0004 AU (오류 표시 줄은 데이터 표시 자 내에 있음). 저농도 데이터의 선형성은 이러한 데이터 포인트의 선형 최소 제곱 적합도에 대한 0.9999의 상관 계수 값으로 증명됩니다. 그림 1에서 볼 수 있듯이 STS-UV는 0.005 AU만큼 낮은 흡광도 값으로도 반복 가능한 고품질의 DNA 흡광도 데이터를 제공합니다.
그림 1 : STS-UV로 측정 한 저농도 (0.15 ~ 2.5 μg / mL) DNA 용액의 흡광도
STS-UV의 선형성과 넓은 동적 범위는 0.15에서 110 μg / mL 범위의 DNA 농도에 대해 그림 3에서 더 입증되었습니다. 이 넓은 농도 및 흡광도 범위에 대한 데이터의 선형성은 0.9996의 R2 값으로 설명됩니다. 110 ug / mL의 흡광도에서 약간의 평탄화 또는 롤오프가 발생하여 흡광도가 대략 1.6 AU에서 100 ~ 110 μg / mL 사이의 선형으로 나타납니다.
그림 2 : 물에서 DNA 0.15 ~ 2.5 μg / mL 범위의 OD260 대 DNA 농도
STS-UV로 측정 한 최대 흡광도는 그림 4에 나와 있습니다. 약 2.1 AU만큼 높은 흡광도 값을 측정했습니다. 적색의 데이터 포인트에 나타난 바와 같이, 농도가있는 DNA의 OD260은 100 ~ 110 μg / mL DNA 사이의 대략 1.6 AU에 매우 선형입니다. 100 μg / mL 이상의 DNA 농도에 대해 측정 된 더 높은 흡광도 값에서 그래프의 평탄화 또는 롤오프는 측정치가 이러한 측정에 대한 미광 한계 근처에 있음을 나타냅니다.
그림 3: OD260 versus DNA concentration for concentrations ranging from 0.15 to 110 µg/mL DNA in water
그림 4 : 0.15 ~ 150 μg / mL 범위의 DNA 농도에 대한 OD260 대 DNA 농도
STS-UV를 사용하면 1cm 길이의 큐벳을 사용하여이 전체 농도 범위를 측정했습니다. 260 nm에서 0.005에서 2.1 AU 범위의 DNA 흡광도를 측정하기 위해 경로 길이 조정이 필요하지 않았습니다.
※ Conclusion
4600 : 1의 다이나믹 레인지와 1500 : 1 이상의 신호 대 노이즈 비율을 갖춘 STS-UV는 컴팩트하고 강력한 마이크로 분광기에 엄청난 성능을 제공합니다. DNA, RNA 및 단백질 측정에 이상적인 STS-UV는 190 nm에서 650 nm의 전체 범위와 약 1.5 nm의 광학 분해능을 제공합니다. STS-UV는 0.15 ~ 150 μg / mL 범위의 DNA 샘플에서 알 수 있듯이 0.005 ~ 2.1 AU 범위의 넓은 흡광도 범위에서 측정 할 수 있습니다. STS-UV는 조절 가능한 샘플링 액세서리가 필요없이 넓은 농도 및 흡광도 범위에서 측정을 가능하게하여 UV 흡광도 측정을 단순화합니다.